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細(xì)胞培養(yǎng)使用血清應(yīng)注意哪些問(wèn)題?

更新時(shí)間:2021-05-10 點(diǎn)擊量:880

  血清的質(zhì)量,種類(lèi)及使用的濃度都有可能影響細(xì)胞的生長(zhǎng),而不同批次的血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)的能力也不同,尤其是對(duì)克隆 細(xì)胞的生長(zhǎng),某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)。注意以下幾點(diǎn):

(1)需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃或-80℃低溫冰箱 中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1 個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱 前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?/p>

(2)Cyagen提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過(guò)濾,切勿直接過(guò)濾血清。否則會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的流失!

(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20 ℃或 -80 ℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20 ℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。影響使用效果!

(4)熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已*解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement )滅活。除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。Cyagen提供的血清是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格處理可以直接使用,不需要特殊的處理,就能夠維持良好的支持效果。

(5)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會(huì)變得渾濁,同時(shí)血清中的有效成分會(huì)破壞而影響血清質(zhì)量。

(6)血清中的沉淀物

絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量。可用離心3000rpm, 5 分鐘去除,也可不用處理。顯微鏡下“小黑點(diǎn)”:經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象“小黑點(diǎn)”,常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下,此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

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