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ELISA結(jié)果影響因素都有哪些?你知道嗎?

更新時間:2017-03-16 點擊量:3508

    ELISA試驗以操作簡單、靈敏度較高、特異性較好的特點在科研領(lǐng)域上得到了廣泛的應(yīng)用,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果都有影響,操作不當(dāng)將引起較大的誤差。下面給大家簡單的講解一下步驟中的影響因素及解決辦法。

加樣
可能原因:1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 2.手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時); 3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

解決辦法:1.標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2.加樣后及時放入孵箱。 3.加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5.標本較多時,請分批操作。

溫育
可能原因:1.孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發(fā),吸附于孔壁,難于清洗*; 2.孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗*。

解決辦法:1.貼封片或加蓋; 2.按說明步驟嚴格控制操作時間。
洗滌
可能原因:1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2.采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導(dǎo)致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導(dǎo)致洗板效果差。 3.反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

解決辦法:1.保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2.合理安排,或多用幾臺洗板機。

顯色
可能原因:1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
解決辦法:1. 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2. 加樣時保持顯色劑不外流; 3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

終止
可能原因:加終止液時產(chǎn)生較多氣泡,導(dǎo)致假陽性增加。
解決辦法:加終止液時應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

讀板
可能原因:讀板時板底不清潔。
解決辦法:應(yīng)保證酶標板清潔。

上海恒遠溫馨提醒:整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

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